分光光度計的光源在紫外光區常用氘燈或氫燈，氘燈的發射強度和使用壽命比氫燈大3-5倍，氫燈在300nm以上能量已很低，而氘燈可使用到400nm。氘燈使用波長范圍為190nm-400nm。可見光區常用光源為鎢燈或鹵鎢燈，當鎢燈燈絲溫度達4000K時，其發射能量大部分在可見區，但燈的壽命顯著減小，為此用鹵鎢燈代替鎢燈，其使用波長范圍為350nm到2000nm。

　　氘燈有插腳式和插腳引線式兩種，插腳式的氘燈發光點高度固定不變，調換新氘燈時不需要調節氘燈發光孔高度，而插腳引線式的，調換新燈時，一定要調節發光孔的高度，使用不方便。同樣的，國產鎢燈在換新燈時大多要調節燈絲高度，也比較麻煩。

　　氘燈和鎢燈在工作時其外殼溫度達數百攝氏度，手不能去觸摸燈的外殼，以免燙傷，即使在不工作狀態，也絕不能用手去觸摸氘燈的通光孔部分和鎢燈的發光面，以免沾上油污，在燈點亮后，油跡將永遠燒結在燈的表面，影響燈的發光強度。

　　氘燈和鎢燈的使用壽命一般達1000h以上，燈的壽命與氘燈使用的恒流電源和鎢燈使用的恒壓電源的設計有關。氘燈在點燃前，燈絲一定要經過預熱，若氘燈的觸發電壓一下就直接加到陽極上，會嚴重影響氘燈壽命。預熱時間一般從10s-30s均可。為延長氘燈壽命，可將氘燈恒流電源的工作電流調節到額定值的一半約180mA左右，可延長其壽命好幾倍。氘燈電源提供的燈絲電壓和燈絲電流要和氘燈的要求匹配，其值有兩種：一種是2.5V，4A；另一種10V，0.8A。對鎢絲燈來說，要保證電源供電電壓必須符合鎢燈的額定工作電壓，否則會影響其使用壽命并使鎢燈工作不穩定。紫外可見分光光度計鎢燈的額定工作電壓為12V，額定工作電流為2-3A。

　　分光光度計的穩定性和光源電源有很大關系，當氘燈電源的電流波動15，它發出的光通量就要波動6.7%；因此，決定氘燈電源穩定性的三個重要指標必須滿足：電流調整率要求達到0.05%、漂移為1×10-3~5×10-4、紋波系數在0.5%以內。

　　氘燈使用壽命可采用比較法測試，按國標標準規定，如果把新的氘燈的測試數據作為100，當被測試的氘燈的能量不足新燈的45%，可認為被測試的氘燈壽命已經到期。在調換新燈前，應對新氘燈的穩定性作一次測試，測試時儀器條件為：波長250nm，光譜帶寬2nm，取能量測量，時間掃描方式，縱坐標能量取50%左右，在儀器預熱0.5h后，對新氘燈作一次1h漂移測試，若漂移小于0.5%/h為合格。在1h內漂移超過0.5%為不合格。