1、樣品制備準備

 

　　首先需要將待測樣品制備好，保證樣品的濃度在一個較小的范圍內，通常在0.1到2.0之間。如果濃度太高，會使吸光度超過儀器的檢測范圍；如果濃度太低，會使誤差增大。

 

　　2、準備空白參照

 

　　為了減少誤差，在進行樣品分析之前，需要準備一個空白參照，相當于沒有待測物質的樣品。空白參照通常是已知化學成分的溶液，或者僅由溶劑組成的溶液。空白參照的吸光度將作為零點進行校準和參考。

 

　　3、確定波長和機器零點

 

　　選擇與待測物質輕微吸收波長相同的波長進行檢測，最好選擇在樣品吸收峰值附近的波長，以獲得最佳的測量精度。另外，在進行測量之前，還需要確定儀器的零點。

 

　　4、在分光光度計中放入樣品和參照溶液

 

　　通常，會在分光光度計中放置兩個試管，一個是裝有待測樣品的試管，另一個是裝有空白參照的試管。這些試管需要與儀器中的光路進行對齊。

 

　　5、讀取數據和計算結果

 

　　一旦樣品和空白參照均被放入儀器中，就可以開始讀取數據并計算結果。分光光度計可以自動讀取并記錄兩個試管中的吸光度值，并計算它們之間的差異，其差值就是分析物質的濃度。計算公式為A=εbc，式中A表示吸光度，ε是當物質的摩爾吸收系數，b是樣品的路徑長度（即光路長度），c是樣品溶液的濃度。

 

　　在進行數據分析時，需要考慮到各種可能的誤差源，如波長漂移、噪聲、路徑長度等。為了減少誤差，應進行儀器校準和使用最佳的樣品濃度。在具體實驗操作時應嚴格按照操作規程進行，記錄所有的細節，并進行多次實驗以確定結果的準確性。